La mayor novedad consistió en la aparición de la polifonía coral. En la música de la Edad Media cada voz o parte de la polifonía era ejecutada por un solista. En el Renacimiento, por el contrario, varios cantores entonan cada una de las voces , formando así un coro. En la música religiosa, la ejecución coral, alternada con dúos o tríos de voces solistas, constituyó la norma habitual.
Los coros estaban formados solo por hombres, ya que las voces femeninas estaban prohibidas dentro de las iglesias, y solían tener entre 10 y 14 cantores, que leían la música en grandes libros corales situados sobre un atril giratorio llamado facistol.
Las composiciones más representativas de la música religiosa fueron:
- El motete, que surgió en el siglo XV, era una pieza polifónica, interpretada generalmente a cuatro voces, que partía casi siempre de un texto religioso en latín. Alcanzó su máximo esplendor con Palestrina.
- La misa se estructuraba sobre los textos litúrgicos de esta celebración (Kyrie, Gloria, Credo, Sanctus y Agnus Dei). Podría inspirarse en temas del repertorio gregoriano o en canciones populares profanas.
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